足球资讯网

COVID-19 呼应——咱们努力于在这场大风行病时代为迷信界供给撑持。领会更多

TRF/TR-FRET (HTRF) 概述

时候分辩荧光 (TRF)

操纵荧光素等传统荧光基团检测荧光强度 (FI) 时,荧光素的发射半衰期很短,约莫只要数纳秒。样品的激起光和发射光的检测会同时停止。虽然微孔板读板机可以或许或许将发射光中的激起光挑选后有用去除,但这类激起光搅扰、微孔板材质和待检测物资自觉光等短半衰期光旌旗灯号常常会搅扰待检测荧光旌旗灯号,致使高背景。

时候分辩荧光 (TRF) 经由历程操纵铕或铽等可以或许或许发射长半衰期荧光旌旗灯号的镧系元素作为荧光基团来下降背景旌旗灯号值搅扰。这类长半衰期荧光旌旗灯号可延续数毫秒,是以可以或许或许操纵脉冲光源(如氙闪灯)激起荧光基团,隔一段时候再停止发射旌旗灯号检测(“计数窗”)。短半衰期荧光(仅延续数纳秒)在旌旗灯号检测之前就会消逝。操纵时候分辩荧光停止检测可大大下降信噪比。最常操纵的镧系元素是铕、铽和钐。这些镧系元素凡是以螯合物或穴合物的情势操纵以取得良好的旌旗灯号强度和不变性。

 

 

时候分辩荧光

时候分辩荧光共振能量转移 (TR-FRET)

 

htrf-camp

非 FRET

供体和受体相隔很远

FRET

供体和受体相隔很近

TR-FRET连系了时候分辩荧光检测手艺和荧光能量共振转移检测(FRET)手艺。在FRET尝试中,生物份子(如卵白等)被荧光基团供受体标记。当生物份子之间彼此感化,供受体荧光基团的间隔被拉近。此时,若供体被激起,它会通报它的发射光能量给受体。受体和供体的发射光具备差别的波长,可以或许或许被微孔板读板机辨别,从而定量生物份子之间的彼此感化。

操纵镧系元素荧光基团作为供体,发射光有很长的半衰期,TR-FRET可以或许或许操纵时候分辩检测荧光,消弭短半衰期背景荧光的搅扰。在TR-FRET尝试中,因为供体荧光基团发射光有较长半衰期,供受体荧光基团的激起和发射都可以或许或许在短半衰期背景荧光消逝后再检测。

均相时候分辩荧光 (HTRF)

TR-FRET

HTRF是一种通用的TR-FRET手艺,该手艺由Cisbio发明,用于检测生物份子间的彼此感化。典范的 HTRF 检测把铕穴状化合物用作供体,无机荧光团 d2 用作受体。供体和受体可以或许或许被用于标记各类生物份子,操纵规模包含表观遗传学,生物标记物定量,GPCR旌旗灯号转导等。HTRF 检测须要一个经 Cisbio 认证能兼容 HTRF 的带 TRF 检测情势的微孔板读板机。

客户钻研的严重冲破

iTeos 操纵咱们的多功效微孔板读板机(酶标仪)来肯定针对肿瘤免疫微环境的疗法

领会更多信息  

 
 

上风和注重事变

与传统荧光检测手艺比拟,TRF 和 TR-FRET 检测的首要长处包含下降背景和进步信噪比,是以可进步活络度。另外,该检测手艺另有一种壮大的夹杂-读数情势,无需停止任何洗濯步骤。这一长处连同尝试的不变性,使该手艺很是合用于主动化和小型化挑选类操纵。

 

操纵和检测

TRF 和 TR-FRET (HTRF) 检测可阐产生归天学历程中的份子彼此感化,被普遍用于钻研激酶、细胞旌旗灯号转导通路、卵白彼此感化、DNA 与卵白的彼此感化、细胞毒性和受体与配体的连系。

TR-FRET 检测示例的概述见右表,几种时候分辩荧光资本见下文。
 

阐发测定 供体 受体 波长
HTRF-Eu/白色* 铕穴状化合物 XL665 或 d2 Ex320 Em1 620/Em2665
HTRF-Tb/白色* 铽穴状化合物 XL665 或 d2 Ex340 Em1 620/Em2665
HTRF-Tb/绿色* 铽穴状化合物 荧光素或 GFP Ex340 Em1 620/Em2520
Lanthascreen Tb** 铽螯合物 荧光素 Ex340 Em1 490/Em2520
Lanthascreen EU** 铕螯合物 Alexa Fluor647 Ex320 Em1 620/Em2665
LANCE(原装)*** 铕螯合物 Surelight® APC Ex320 Em1 620/Em2665
LANCE Ultra*** 铕螯合物 ULight Ex320 Em1 620/Em2665

  • HTRF 检测

    HTRF 检测

    Cisbio 的均相时候分辩荧光 (HTRF) 检测涵盖 G 卵白偶联受体、激酶和细胞旌旗灯号转导、表观遗传学和生物标记物等范畴。各类百般的试剂和试剂盒都可操纵于卵白间彼此感化、核受体检测、受体二聚化、配体连系、受体内化、酶检测等多个方面的钻研。

    HTRF 触及操纵两个荧光团(供体和受体)标记卵白或其余方针生物份子。当生物份子彼此感化时,它们的接近可以或许使从供体到受体荧光团产生荧光共振能量转移 (FRET) 。操纵性命周期较长的荧光镧系元素穴合物作为供体可以或许或许在 HTRF 检测中停止时候分辩检测,从而尽可以或许削减化合物和其余材料的长久背景荧光。经由历程微孔板读板机检测时候分辩 FRET (TR-FRET) 可供给生物份子连系的读数。

    合用于均相时候分辩荧光 (HTRF) 的微孔板读板机

    合用于均相时候分辩荧光 (HTRF) 的微孔板读板机

    要取得抱负的 HTRF 成果,须要经考证可知足 Cisbio 设定的 HTRF 机能规范的微孔板读板机。读板机的光学器件、动力、检测器和用于检测 HTRF 的设置城市影响机能。咱们的读板机操纵优化的组件停止 HTRF 检测,包含合用于 SpectraMax i3xParadigm 多功效微孔板读板机的 HTRF 检测卡盒,和合用于 SpectraMax iD5 读板机的强化时候分辩荧光 (TRF) 模块和经考证的滤光片。

    Cisbio 的均相时候分辩荧光 (HTRF) 认证打算可确保带有“合用于 HTRF”徽标的读板机知足抱负 HTRF 机能所需的规格。本手艺申明先容了经 Cisbio 考证的合用于 HTRF 的 Molecular Devices 微孔板读板机的优化设置。

  • 操纵HTRF手艺检测人源 TNFα

    操纵HTRF手艺检测人源 TNFα

    人源TNFα 检测试剂盒可间接对 TNFα 停止定量检测。它操纵一种夹心免疫测定方式,此中触及两种特同性抗体:一种是用 Eu 穴状化合物标记的抗 TNFα,另外一种是用 XL665 或 d2 标记的抗 TNFα。在有 TNFα 的环境下,这两种抗体都能连系 TNFα,使得两种标记彼此接近,从而产生 TRFRET(图 1)。旌旗灯号与样品中抗原的浓度成比例。

    在本操纵申明中,咱们展现了 SpectraMax® Paradigm® 多功效微孔读板机(酶标仪)若何用良好的Z’因子停止壮大的免洗细胞因子检测尝试。

    阅读操纵申明  

    操纵HTRF检测细胞因子,连系细胞活性综合评估

    操纵HTRF检测细胞因子,连系细胞活性综合评估

    促炎性和抗炎性细胞因子在本身免疫性和炎症性和沾染性疾病方面阐扬首要感化。它们还在代谢性疾病和肿瘤(特别是在抗肿瘤免疫应对历程中)阐扬关头感化。Cisbio Bioassays 的均相时候分辩荧光 (HTRF) 为各类细胞因子和趋化因子的定量供给了一个通用平台。

    本操纵申明显现了若何操纵带 SpectraMax® Minimax® 300 成像细胞计数器的 SpectraMax i3x® 多功效微孔板读板机来停止细胞因子排泄和细胞活性的相干阐发。

    阅读操纵申明  

  • 测定氧化应激和糖酵解活性

    测定氧化应激和糖酵解活性

    为了存活,细胞须要三磷酸腺苷 (ATP) 情势的燃料来履行最根基的生物历程。这类燃料经由历程糖酵解和线粒体呼吸感化产生。虽然两者都能产生 ATP,但糖酵解在缺氧时依然阐扬感化,而线粒体则须要氧气能力停止氧化磷酸化 (OXPHOS) 的最初一步。

    本操纵申明的长处:

    阅读操纵申明  

    HTRF cAMP dynamic 2 和 IP-One 检测

    HTRF cAMP dynamic 2 和 IP-One 检测

    此处用 cAMP dynamic 2 和 IP-One 两种差别的 HTRF 检测试剂盒展现了在 SpectraMax M5e微孔板读板机上HTRF的检测机能。G-卵白偶联受体经由历程调理 cAMP 和增添 IP3 介导的细胞内钙程度这两个首要路子阐扬感化。借助 cAMP dynamic 2 试剂盒,操纵 Eu 穴状化合物标记的单克隆抗 cAMP 抗体和 d2 标记的 cAMP 可检测 cAMP 程度。IP-One 检测的情势与之类似,操纵一种对 IP1 特同性的单克隆抗体,一种更不变的 IP3 下流代谢物,有氯化锂存在的环境下,这类代谢物会在旌旗灯号转导细胞中堆积。

    本操纵申明描写了操纵 cAMP dynamic 2 和 IP-One 试剂盒时天生的细胞检测数据和规范曲线。这些 HTRF 数据显现了操纵 SpectraMax M5e 读板机时能取得的绝佳静态规模和 Z' 因子2。

    阅读操纵申明  

  • HTRF cAMP HiRange 检测

    HTRF cAMP HiRange 检测

    请点击此处以缩小图象

    HTRF cAMP HiRange 试剂盒可对细胞样品中的环磷酸腺苷(cAMP:环腺苷酸 3’, 5’-单磷酸盐)停止定量。cAMP 是 G-卵白偶联受体 (GPCR) 旌旗灯号转导中的一个关头第二信使。配体连系 GPCR 后会产生构型转变,激活受体,转而激活 G 卵白。

    在本操纵申明中,咱们揭露了若何操纵 SpectraMax® 多功效微孔板读板机来停止靠得住的高通量 HTRF® 检测,并取得良好的 Z’ 因子和高度可反复的 EC50 值。

    阅读操纵申明  

    用于 Transcreener TR-FRET 检测的优化设置

    Transcreener TR-FRET 检测

    Transcreener® TR-FRET 检测属于单步骤合作性免疫测定,可操纵远红外时候分辩荧光共振能量转移 (TR-FRET) 读数间接检测核苷酸。领会若何在 SpectraMax iD5 和 i3x 多功效微孔板读板机上优化用于 Transcreener TR-FRET 检测的设置。

    阅读操纵申明  

  • 从 ELISA 到 HTRF 表观遗传学

    从 ELISA 到 HTRF 表观遗传学

    操纵优化的微孔板读板机设置和简化的阐发降服 HTRF 检测挑衅。

    下载电子书  

时候分辩荧光 (TRF) / TR-FRET (HTRF) 资本

相干产物和办事