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单克隆性

记实单克隆性——医治性细胞系的羁系方针

甚么是单克隆性?

单克隆性是描写发源于单个祖细胞(单细胞),并是以属于单克隆的细胞系的术语。细胞株开辟和单克隆性考证是生发生物制药份子(如单克隆抗体)的进程中的关头步骤。在分手不变抒发方针卵白的单个活细胞后,可成立细胞株。此进程中的一个关头结点是记实克隆性证据,以确保细胞系的遗传可反复性。

单克隆性的记实(医治性细胞系的羁系方针)凡是都是图象情势的,据此可记实单细胞的图象并将其归入羁系文件中。

单克隆性考证——查抄集落发源

单克隆性考证:查抄克隆发源。每一个孔的发展(图象)汗青可追溯到其出发点:供给单克隆性的证据

单克隆性为甚么很主要?

跟着细胞株开辟律例日趋严酷,钻研职员将须要停止单细胞克隆并供给细胞系源于某个单细胞的证据:克隆性证据。传统克隆方式(若无限浓缩和荧光激活细胞分选法 (FACS))利用统计阐发来肯定单克隆性的相信度。可是,单克隆性的记实须要加倍靠得住的生物处置手艺和方式。此刻,很多迷信家凡是利用成像体系(如 CloneSelect Imager成像仪)来考证单克隆性和监测细胞培育基中的细胞发展。另外。

细胞株开辟须要较高的单克隆性确证度

开辟抒发特定方针卵白的细胞株对生物成品的发生而言相当主要,并且羁系机构请求需具备单克隆性的证据能力将生物产物投入市场。传统方式包含在第 0 天利用透射白光察看微孔,以确认单细胞的存在。可是,这类方式不无挑衅,由于细胞碎片和微孔伪影很轻易被误以为细胞。是以,细胞株开辟职员凡是对克隆状况下的细胞停止评价,并追溯克隆的发源以确认单克隆性。

该任务流程侧重于利用 CloneSelect Imager成像体系按照方针图象阐发来考证单克隆性的进程。与用于停止单细胞分选的 CloneSelect 单细胞分手体系连系利用,可进步克隆成活率和基于图象的单克隆性确证度,从而改良该任务流程。

单克隆性任务流程
单克隆性任务流程
  1. 将单细胞分选进微孔板孔中 – 必须分手并克隆单个活细胞以确保细胞群的基因不异,从而较着下降抒发的异质性。

  2. 在第 0 天和厥后几天扫描平板 WL – 在第 0 天和厥后几天对平板停止成像。单克隆性的记实(医治细胞株的一个羁系方针)凡是都是图象情势的,据此可记实单细胞的图象并将其归入羁系文件中。

  3. 查抄平板扫描成果并评价整体增生 (WL) 环境 – 查抄并阐发追踪细胞发展速度、会合度测定和克隆构成的图象。

  4. 确认单克隆性并导出微孔数据以供出于羁系方针停止提交 – 确认单克隆性并导出具体微孔数据以供出于羁系方针停止提交

利用单细胞分手体系进步克隆成活率

CloneSelect 单细胞分手体系系列是一个全主动体系,它接纳专有微流控手艺和及时图象阐发,分选出单细胞并接种到规范微孔板中,同时经由进程图象记实供给单克隆性确证度。它经由进程供给图象情势的克隆性证据、基于白光(c. sight 和 f. sight 体系)或可选荧光(仅 f. sight 体系)的敏捷高效单细胞接种、超卓的接种后细胞发展、更低水平的穿插净化危险,和极低的保护本钱来处置基于无限浓缩和流式细胞术的细胞分选的错误谬误。与 CloneSelect Imager成像仪连系利用时,单细胞分手体系系列表现出对这两种任务流程的改良,即进步了克隆成活率和基于图象的单克隆性确证度。

利用单细胞分手体系进步克隆成活率

CloneSelect 单细胞分手体系手艺 (A) 在将含细胞的样本上样至分手槽中后,将分手槽装配到单细胞分手体系 (SCP) 上,而后可起头单细胞分手。在分手进程中,
压电致动器会以可展望的挨次持续发生液滴,间接经由进程真空机器装配在喷嘴下方虹吸去除不含细胞或含不止一个细胞的液滴。
辨认出单细胞事务时,机器封闭装配会阻断真空状况,使含单细胞的液滴落入微孔中。(B) 检测到单细胞事务时,将在喷嘴处捕获 5 张图象以供给克隆性证据。
图象 -3 显此刻液滴喷出前存在一个细胞,图象 4 标记出含单细胞的地区,而图象 5 显现液滴喷出后的喷嘴。

微孔板成像、克隆表征和报告天生 微孔板成像、克隆表征和报告天生

(A) 对源自单细胞分手的第 10 天克隆停止成像。可经由进程“平板略缩图”选项卡查抄克隆。点击各微孔便可为用户导航至“查抄图象”选项卡,此中将显现全孔图象。(B) “Loci Count”选项卡许可经由进程调剂克隆巨细和慎密度(一个圆度方针)来优化克隆计数。(C) 在“天生报告”选项卡中,可为一个系列中的各时候点指定和调剂细胞地区(绿色框),以表征从单细胞变为克隆的发展。

甚么是单克隆,甚么不是单克隆

经由进程利用 CloneSelect Imager成像仪软件来缩小各个牢固克隆,可以或许查抄差别时候点的克隆图象,从而追踪发展并肯定一个克隆是不是为单克隆。下图显现了两个克隆的图象。经由进程察看两个克隆的发展并追溯直至第 0 天的图象,可肯定克隆是不是发源于一个或多个细胞。向半固体培育基增加微珠(如黄色圈所示)便可作为地位对照,以确认每次成像的都是统一克隆。

单克隆单细胞集落

中国仓鼠卵巢悬浮 (CHO-S) 细胞在 CloneMedia CHO Growth A 半固体培育基中的发展利用 CloneSelect Imager 成像仪在差别时候点捕获 6 孔板中的图象。在第 0 地利,顶排较着察看到存在一个细胞,而底排察看到两个细胞。黄色圈显现作为地位对照以确认随时候成像的是统一克隆的微珠的地位。

供给单克隆性图象证据(报告)

在细胞株开辟进程中供给单克隆性的图象证实并不像导出单细胞图象一样简略。比方,还应查抄全孔高分辩率图象以确保不存在第二个细胞。

仅需几回点击,CloneSelect™ Imager成像仪 (CSI) 上的“单克隆性报告”功效便可客观地将证实克隆性所需的撑持性图象证据清算到可轻松同享的报告中,从而为钻研职员节流野生履行不异进程所需的时候。

单克隆性考证

单克隆性确证方式

领会更多有关用于考证和记实单克隆性的差别方式的信息

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    利用钙黄绿素 AM 来确证克隆性

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    在此,咱们展现了一个优化的任务流程,此中将荧光试剂(钙黄绿素 AM)和显现出与无标记状况近似的活性,同时还能供给较高的克隆性确证度,并且具备荧光功效的 CloneSelect™ Imager成像仪连系利用。

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    电子书:优化您的优良细胞株

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    在该电子书中,咱们供给了细胞株开辟任务流程和高通量处置打算(用于加速流程并完成高产哺乳植物细胞株的轻松疾速遴选)的概述。

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  • 用于辨认单克隆 CHO-S 细胞的荧光方式

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    增进细胞株开辟的疾速单克隆考证方式

    虽然可以或许经由进程白光成像来考证单克隆性,但碎片、尘埃和蔼泡使辨认单细胞变得坚苦且耗时,这可以或许致使高代价克隆丧失。在此,咱们提出一种利用 CellTracker Green来辨认单克隆 CHO-S 细胞的荧光方式。

    细胞株开辟须要较高的单克隆性确证度

    细胞株开辟须要较高的单克隆性确证度

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  • 辨认半固体培育基中发展的单克隆 CHO-S 细胞

    辨认半固体培育基中发展的单克隆 CHO-S 细胞

    靠得住辨认半固体培育基中发展的单克隆 CHO-S 细胞

    比拟在液体培育基中停止无限浓缩,在 CloneMedia CHO Growth A 中培育 CHO 细胞是一种加倍有用的 CHO 细胞克隆方式。半固体培育基可牢固细胞,从而避免细胞在惯例处置进程中挪动。这使得钻研职员可以或许更靠得住追踪单个细胞发展成一个克隆的环境。

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    经由进程更高的克隆性确证度来进步克隆效力

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    优化的任务流程可经由进程进步增加效力来节流时候、精神,并下降耗损品和试剂本钱,同时供给较高的克隆确证度和敏捷记实,且记实文件可立即提交给羁系机构。

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  • 单克隆性报告

    CloneSelect 成像仪单克隆性报告功效

    CloneSelect Imager成像仪单克隆性报告功效

    仅需几回点击,CloneSelect Imager 成像仪上的“单克隆性报告”功效便可客观地将证实克隆性所需的撑持性图象证据清算到可轻松同享的报告中,从而为钻研职员节流野生履行不异进程所需的时候。

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单克隆性资本

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单克隆性任务流程

单克隆性任务流程

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