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G 卵白偶联受体 (GPCR) 和离子通道

G 卵白偶联受体 (GPCR) 和离子通道

GPCRs(G 卵白偶联受体)是最大的卵白家属,成员在 600 和 1000 之间,并且已证明其与良多一般生物学和病理学相干。它们也属于七次跨膜 (7-TM) 受体,并且约莫 45% 的古代药物会以该卵白作为方针靶点。GPCR 的功效极为多样,可辨认各类差别的配体,包罗光子、小份子和卵白。

离子通道是细胞膜中可以或许或许让离子自在收支细胞的孔道。人类基因组中有跨越 400 个离子通道基因。它们中有良多已成为风行当下的药物的靶标。可以或许或许操纵如膜片钳手艺的传统电心理学装备对离子通道活性停止直接丈量。但其通量很是低。操纵对膜电位转变敏感的荧光基团、钙流和钾流也可直接测定离子通道活性且通量更高。

用于挑选针对 GPCRs和离子通道的先导化合物的处置打算


咱们供给各类检测和仪器处置打算来撑持 GPCR 和离子通道功效的钻研,包罗检测试剂盒、FLIPR体系和微孔板读板机。

  • 钙流检测

    钙流检测

    对钙流的评价是持久被承认、靠得住且实在的对细胞勾当的检测。钙流可用作神经递质开释、GPCR 活性、电压或配体门控离子通道和心肌细胞等浩繁细胞历程的检测方针。FLIPR Penta 体系是一种药物发明东西,由于具备易用性、活络性和用户可设置装备摆设性,可用于在高通量和超高通量下评价钙流。

    心肌细胞挑选

    心肌细胞挑选

    药物引诱的功效性心脏毒性的初期展望须要可合用于停止高通量挑选的靠得住体外体系。现成可用的 iPSC 源性民气肌细胞可与钙敏传染料连系操纵,并且可跟着细胞内钙的变更监测心率。可操纵咱们的 ScreenWorks PeakPro 软件来阐发这些钙旌旗灯号峰值,该软件可为钻研者供给一套用以定量心肌细胞活性的壮大东西。

  • 操纵 FLIPR 钾检测试剂盒来判定 hERG 通道阻断剂的特点

    hERG 通道阻断剂的特点判定

    Human ether-à-go-go 相干基因 (hERG) 离子通道的药物引诱按捺与患者可以或许或许呈现致命的室性疾速型心律变态、转变型室性心动过速的易理性有关。最近几年来,由于对 hERG 具备中靶效应,良多经 FDA 核准的药物已加入了市场。是以,对在药物发明进程的初期阶段,发明可以或许或许阻断 hERG 通道的化合物变得愈来愈火急。在此,咱们提出在 FLIPR Penta 体系上操纵 FLIPR 钾检测试剂盒以钻研 hERG 化合物活性。

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    细胞内钙旌旗灯号反映检测

    细胞内钙旌旗灯号反映检测

    G 卵白偶联受体 (GPCR) 在细胞旌旗灯号转导方面起侧主要感化。当受体被配体激活时,受体构象就会转变,从而触发细胞内 G 卵白的激活。激活 G 卵白具备引诱各类胞内信使(包罗钙)级联反映才能。FLIPR Penta 体系可停止高通量的功效性细胞检测,是药物发明中的首选体系,合用于评价经由进程操纵荧光钙敏感报告基因染料检测到的胞内钙变更。在此,咱们供给在 FLIPR Penta 体系上操纵 FLIPR® 钙检测试剂盒(一种均相、敏捷且靠得住的荧光检测)停止钙流检测的根基尝试步骤。

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  • 合用于 G 卵白偶联受体检测的均相处置打算

    合用于 G 卵白偶联受体检测的均相处置打算

    在初期药物发明进程中,细胞检测已成为挑选和化合物阐发方面不可或缺的方式。迄今为止,此类检测已被证明是受体特点判定钻研、开端挑选勾当和化合物阐发法式中最靠得住且可反复的方式。出格是对 Gq 偶联的 G 卵白偶联受体靶标,接纳淬灭手艺的均相荧光钙流检测是首选方式。

    将新荧光团和久经考证的淬灭手艺相连系, 可供给靠得住的药理学功效、更大的旌旗灯号窗口,还可进步检测机能。凭仗 FLIPR 钙 5 检测试剂盒和 FLIPR Penta 体系,可以或许或许借助均一尝试对各类受体和靶标停止分歧的挑选,出格是钙旌旗灯号反映较小的受体和靶标。

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    活细胞 Gi 和 Gs 偶联的 G 卵白偶联受体第二信使旌旗灯号转导

    G 卵白偶联受体第二信使旌旗灯号转导

    对 Gi 和 Gs 偶联的 G 卵白偶联受体第二信使旌旗灯号活性的检测,凡是操纵喷射性连系或须要停止细胞裂解的起点 cAMP 检测等方式来完成。此类检测在细胞反映中的单个时候点测定活性,并且不供给能源学信息。另外一挑选是操纵 Gi 和 Gs 偶联的 G 卵白偶联受体与 Gα16 的强迫偶联,随后在冲动剂受体激活后停止钙流荧光检测。一样,这类检测是次优的,由于它不经由进程生物相干的 cAMP 通路收回旌旗灯号。

    在此,咱们操纵 FLIPR Penta 体系展现了不变抒发 GloSensor 质粒的 CHO-K1 和 HEK-293 细胞系中的内源性受体活性。

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  • 活细胞能源学检测

    活细胞能源学检测

    ImageXpress Confocal 和 Micro 4 高内在成像体系供给可选移液体系和情况节制模块,可在疾速能源学或扩大延时尝试中完成用于增加化合物或互换培育基的单通道移液。Transfluor GPCR 细胞检测试剂盒 是一个在高内在挑选 (HCS) 时代操纵的主要东西,可用于操纵 GFP 标记的 ß 按捺卵白和主动成像阐发,经由进程定量 GPCR 脱敏和轮回来追踪 G 卵白偶联受体 (GPCR) 激活。

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    膜电位检测

    膜电位检测

    电压门控离子通道存在于心脏、骨骼肌、大脑和神经细胞的可高兴细胞膜中。封锁或调理此类通道可阐扬医治感化,或可搅扰一般的细胞功效。是以,影响电压门控离子通道的化合物是药物发明中的主要靶标。

    FLIPR® 膜电势检测试剂盒可供给基于均相荧光的制剂,以用于察看与离子通道激活和离子转运卵白相干的及时膜电位变更。

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  • 监测 Gq 卵白偶联受体活性

    监测 Gq 卵白偶联受体活性

    凡是,在高通量及时荧光检测阐发体系(FLIPR)上操纵钙敏传染料可在活细胞中及时监测到 Gq 卵白偶联受体激活。FLIPR的主动液体处置凡是须要将冲动剂化合物保送至微孔板中的细胞,而检测体系则对由化合物引诱的荧光强度变更停止及时读取。对天生的能源学读数停止阐发可得出对化合物反映特点的信息,包罗冲动剂和拮抗剂的 EC50 和 IC50 值。

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    钾通道检测尝试

    钾通道检测尝试

    细胞中钾离子通道的功效性评价在药物发明进程中相当主要,出格是在触及到心脏宁静性时。FLIPR® 钾检测试剂盒操纵电压和配体门控钾 (K+) 通道对铊离子 (Tl+) 的通透性。在该检测中,一种新型、高度敏感的 Tl+ 唆使剂染料会发生与开放状况下钾通道数目成比例的敞亮荧光旌旗灯号,从而供给钾离子通道活性的功效性唆使

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  • 合用于高通量挑选的钾离子通道检测

    合用于高通量挑选的钾离子通道检测

    钾通道担任各类细胞功效,包罗保持和调控膜电位、排泄盐、激素和神经递质。钾通道功效妨碍与良多人类疾病有关。对钾通道的中靶药物效应与心脏毒性有关。由于具备关头的心理功效并可影响药物引诱毒性,钾通道已被制药行业普遍钻研。另外,功效性细胞检测愈来愈多地被操纵,由于它们可发生更具心理相干性的成果。以高通量情势测定 K+ 离子通道活性富有挑衅。一种普遍接纳的手艺是操纵荧光方式,此中操纵对铊-铊连系敏感的荧光染料作为钾通道活性的替换测定。

    在此,咱们展现 FLIPR® 钾检测试剂盒若何阐发 FLIPR Penta 体系上的钾离子通道活性。

GPCR 和离子通道的资本

GPCR 和离子通道的相干产物和办事